Les proves PCR (reacció en cadena de la polimerasa) són una tecnologia bàsica en diagnòstic molecular. L’estandardització dels seus processos d’embalatge i prova afecta directament la precisió i la bioseguretat dels resultats. Aquest article proporciona una perspectiva professional sobre els punts de control de qualitat clau durant tot el procés de prova de PCR.
El rebut i el pretractament de la mostra són els primers passos del procés. Els laboratoris han de verificar estrictament la identificació de mostres, les condicions de transport i el temps d’emmagatzematge per assegurar la integritat de la mostra. Un cop rebuda, les mostres s’han de numerar i registrar en un gabinet de bioseguretat i experimentar procediments de processament pre - com la lisi i l’extracció d’àcid nucleic basat en el tipus de prova. Es requereix un sistema de verificació de persones - durant aquesta etapa per evitar la contaminació creuada -.
La preparació del sistema de reacció PCR s’ha de realitzar dins d’un banc net. Els operadors han de portar equips de protecció de nivell 3 i utilitzar nucleasa - consumibles gratuïts. La preparació del reactiu s’adhereix al principi del “flux de treball unidireccional”, passant de l’àrea de preparació de reactius a l’àrea de processament de mostres i després a l’àrea d’amplificació. Els controls negatius, els controls positius i els controls interns s’han d’incloure a cada lot de reacció per controlar la validesa experimental.
Durant la fase d'amplificació i prova, l'instrument PCR ha de ser calibrat pre - i els paràmetres de ciclisme de temperatura verificats. El procediment de reacció inclou normalment tres passos: desnaturalització (94 - 95 graus), recobriment (50-65 graus) i extensió (72 graus). El nombre de cicles s’ajusta en funció de l’objectiu de detecció. La PCR de fluorescència en temps real també requereix supervisar el llindar del senyal de fluorescència dels canals específics.
L’anàlisi i els informes de resultats han de ser realitzats per tècnics qualificats. Almenys dos professionals han de revisar les dades en brut per confirmar la morfologia de la corba d’amplificació, la plausibilitat del valor TC i el compliment dels materials de control de qualitat amb els estàndards. L’informe final ha d’incloure informació sobre la metodologia de prova, la base per a la interpretació de resultats i una declaració de limitacions de prova.
Tot el procés s’adhereix estrictament a la ISO 15189 i a les especificacions de CDC rellevants. S’implementa un sistema de triple garantia de control ambiental, manteniment d’equips i formació de personal per assegurar la fiabilitat i la traçabilitat de les proves de PCR.